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硫酸二甲酯作為甲基化試劑,可合成二甲基亞砜、苯甲醚、安乃近、咖啡因、安替比林、甲氧基嘧啶、甲胺磷以及農藥乙酰甲胺磷等。它與所Chemicalbook有的強烷基化試劑類似,具高毒性,皮膚接觸或吸入均有嚴重危害。在有機化學中的應用已逐漸被低毒的碳酸二甲酯和三氟甲磺酸甲酯所取代。
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